单倍型造血干细胞移植  
    异基因造血干细胞移植，由于匹配供髓来源有限，使需要接受移植治疗的病人，失去治疗机会，同胞间HLA匹配可达25%，在具有相当规模骨髓库，如欧美国家登记人数达450万人，台湾骨髓库达23万人，这也仅能解决30-40%无关供者，但对需要移植病人，几乎均能找到单倍型相合供髓者，它为造血干细胞移植奠定了基本条件。

    欧美80年代起尝试单倍型相关造血干细胞移植,由于没有去除T细胞，重症急性GVHD发生率高，导致本工作受阻。全T细胞去除后移植可跨越aGVHD屏障，但是植入物的排斥、白血病的复发及移植后免疫功能重建迟缓，使之抵消去除T细胞疗效，移植同样失败。
90年代后，由于新技术的应用，单倍型造血干细胞移植取得了很大进展，它从几个方面开展了研究。

（1）不进行全T 细胞的清除，选择性部分T细胞清除。
（2）加大移植物中CD34+细胞的含量。
（3）诱导T细胞免疫耐受。

    具有代表研究报告 Henslee-Donwney (Oxford United Kingdon,Isis Medical Media Ltd,1998)单倍型相关造血干细胞移植中，体内用ATG和体外用T10B9鼠单抗与兔补体结合，选择性去除T细胞，去除αβ链的T细胞受体部分，保留γδ的T细胞，最后使病人接受的T细胞剂量为0.75×105/kg,在68例可评价的病人，随访4.2月，取得29.4%无病生存。Aversa F (N Engl J Med 1998)加大CD34+细胞和去除T细胞的移植，结果是43例白血病单倍体造血干细胞移植后，随访18个月，无病存活28%。Guinan (N Engl J Med 1999)用CTLA4-Ig阻断T细胞活化信号，CTLA4-Ig是B7分子受体，仅在T 细胞活化后出现，它与CD28不同的是它不在T 细胞表面持续表达，该移植技术利用CTLA4分子可溶性片段与人类免疫球蛋白结合形成融合蛋白CTLA4-Ig，通过竞争性与B7结合，阻断B7与CD28结合，实现共刺激信号的阻断，降低急性GVHD。报告12例单倍体骨髓移植,结果1/12例早期死亡,2/12例发生II度以上aGVHD,5/12例存活,中位随访6.7月，42% 无病生存。

    这些研究方法的建立，使单倍型造血干细胞移植成为可能，随着移植后时间的延长，对移植后疗效，移植过程中体内外操作的复杂性，使本工作推广应用仍受到限制，加之移植过程中对去除T细胞量上掌握的困难，使aGVHD的发生仍存在掌握上的问题，特别在单倍型造血干细胞移植中，目前尚无去除T细胞不增加复发率和排斥率的研究报告，毫无疑问，不去除T细胞而又可控制重症GVHD，并促进免疫功能重建，是一项有意义的研究课题。

    本研究进行体外不去T细胞的单倍型造血干细胞移植，我们的研究观察到（Biol of BMT 2002;8和实验血液学 2002；2）供者接受G-CSF后采髓，增加祖细胞含量，改变了T淋巴细胞细胞因子分泌的生物学特性，此外对受者移植不同时期，使用作用机制不同免疫调节处理，将GVHD控制在发病前。自1999年2月至2006年5月，连续对110例需要移植而又无HLA匹配或者HLA一个位点不匹配的白血病病人，进行单倍型造血干细胞移植，供受者为HLA-A,B和 DR位点中 2～3个位点不合的单倍型相关移植,本工作分2阶段完成，前期完成15例，后期完成95例，在后期完成的95例是在前期15例的基础上加用抗CD25单克隆抗体，两组均采用清髓性预处理方案和连续免疫抑制剂预防GVHD，供者接受 G-CSF促进后采髓, 采髓量按受者体重15-20ml/kg采集，中位数1.3L(范围0.6～1.6L),采髓后未去T细胞输注,并进行有核细胞计数（TNC）、CD3+、CD34+和粒-单集落形成单位（CFU-GM）测定。急性GVHD预防使用4种免疫抑制剂联合应用，移植后常规应用环胞菌素A和短程氨甲蝶呤外，加用霉酚酸脂（MMF）及抗胸腺细胞球蛋白（ATG Fresennius S）。后期移植的95例加用CD25单克隆抗体预防GVHD, CD25单克隆抗体在移植前的2小时和移植后第4天应用,每次20mg,持续40分钟静脉点滴。移植后发生I度急性GVHD或高于I度时，加用甲基强的松龙1-2 mg·kg-1·d-1,控制病情后逐渐减量。移植后每天计数血细胞，观察植入情况。移植后不同时期进行植入直接证据检测，如HLA分型检测， ABO血型不合者，检测血型转变，供、受者性别不同者，则检测性染色体转变。结果是全部病例获得造血重建，植入物中TNC、CD3、CD34+和CFU-GM中位数分别是8.3(范围 4.2-13.3)×108/kg、50(范围37-71)×106/kg、 6.1(范围3.1-10.8)×106/kg和59(范围39-96)×104/kg,中性粒细胞>0.5×109/L的中位天数是19天(范围11-25天),血小板>20×109/L的中位天数是21天(范围13-32天)。两组移植后中性粒细胞和血小板恢复无差异（P>0.05）。所有病人均证实移植后完全供者造血，两组发生急性Ⅱ-Ⅳ GVHD分别是33.3%与11.4%,通过比较两组差异有显著性意义(P<0.05)。移植后存活大于6个月，未用抗体组2/9形成广泛性cGVHD，抗体组9/69出现慢性广泛型GVHD，口服强的松和环孢菌素A控制了病情，两组比较无显著差异。移植后对T细胞亚群，B细胞和NK细胞的恢复进行动态观察，15例在移植后1，3，6，12和18个月，取外周血用流式细胞仪与免疫荧光进行了测定，并对15例健康供者测定的结果为对照，结果显示，通过比较, CD4+细胞在移植后12个月仍未恢复正常,直到18月恢复，于移植后6个月CD4+恢复达到200/ul。CD3+细胞在移植后12月基本恢复, CD8+细胞于移植后3个月恢复,B细胞系CD19细胞在移植后6个月恢复,NK细胞系CD56细胞于移植后1个月恢复正常。而Aversa F去除T细胞移植后，CD4+细胞达100-200/ul需10-16月，免疫重建的缓慢，使移植后由于感染造成死亡率达到40%，T细胞的不清除，对免疫功能的重建起到良好的作用。110例单倍型造血干细胞移植，目前68例无病存活，Kavnofshy评价生存质量在90%以上，中位随访26月(范围6-72月),全部病例移植后2年无病生存61.5%。
G-CSF动员后骨髓细胞中T淋巴细胞与高内皮静脉相互作用的归巢受体及L-选择凝集素（CD62L）下降，阻滞T细胞在淋巴结外渗，增加血管池内细胞数，诱导Ⅰ型T细胞向Ⅱ型T细胞转化，阻滞Ⅰ型T细胞对IFN-α的产生及毒性T淋巴细胞的募集。我们也在对照研究及单倍型移植中，证明G-CSF使用后，可降低急性Ⅱ-Ⅳ GVHD发生率（Clin Transpl 2001;15和中华内科杂志 2001；11）。

    在本研究的前期单倍型移植病例急性Ⅱ-Ⅳ GVHD发生率33.3%（BMT 2003;30）,后35例病人加用CD25抗体，该单抗是IL-2受体α链的单克隆抗体，它作用IL-2受体T细胞α链，T细胞活化后，IL2受体α链迅速表达和被激活，它与IL-2的高亲和力，刺激T 细胞增殖。本抗体在T细胞克隆增殖前，针对活化T细胞IL-2受体α链，选择性的抑制T细胞功能，降低aGVHD发生。

    单倍型造血干细胞移植尚有许多领域需要研究，G-CSF动员后造血干细胞的变化，在实验研究和临床研究中，发现动员不同时间，除CD34+,CFU-GM变化外，G-CSF动员7天后骨髓中T细胞NK1.1+/NK1.1-比值有35/65增加至65/35，增加了NK1.1+T细胞与CD8+,总的T细胞降低，而在临床中也观察到CD4/CD8比值的变化（ASH2000,3310,BMT 1994;13）,这与降低aGVHD有相关性，Starzl双向移植排斥理论，在单倍型中的应用，HGV与GVH在如何免疫抑制作用下，相互应答达到相互耐受到无反应状态？这需要进一步研究与发展。最近，Ruggeri(Scince 2002;15)体外扩展一种表达NK和T细胞标志的淋巴细胞，它的异基因反应性增加抗肿瘤效应，在单倍型移植中，HLA不相合，可预示供者存在抗宿主的NK细胞，观察到抗复发，防治移植物排斥而不发生急性GVHD现象，这种自然杀伤抑制受体（KIR）,无疑对半相合移植增加了新内容，对预示单倍型移植的预后及干预预后，显示出潜在的可能性。