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常用的临床免疫学检测技术5

第五讲 胶体金技术
 
胶体金技术是七十年代推出的一门检测技术,广泛应用于生物学和医学等领域,目前已成为一种最常用的快速的检测技术。

一、基本原理及类型
该技术以微孔膜作为固相,固相膜有很多孔,像滤纸一样,常用的固相膜为硝酸纤维素膜,液体可以穿过流出,也可以通过毛细管作用在膜上向前移动。利用这两种性能建立了两种不同类型的快速检测方法,前者叫免疫渗滤试验,后者叫免疫层析试验,两者统称为“金标”。

胶体金也称金溶胶,是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金具有胶体性质、呈色性及光吸收性。因此肉眼观察结果是最简单、方便的检测方法。
二、免疫渗滤试验(IFA)
1、基本原理:以硝酸纤维素膜为载体,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上,以液体渗滤过膜的方式迅速完成。

2、试剂:
    (1)渗滤装置:由塑料小盒,吸水垫和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素(NC)膜片三部分组成。塑料小盒可以是多种形状的;盒盖的中央内有一直径约0.4-0.8cm的小圆孔,盒内垫放吸水垫料,NC膜片安放在正对盒盖的圆孔下,紧密关闭盒盖,使NC膜片贴紧吸水垫料。整个反应过程都在渗滤装置上进行。

 (2)试剂盒组成:IFA试剂盒的3个基本试剂成分是反应板,结合物和洗涤液。为了提供质控保证,用于抗原测定的试剂盒还应包括抗原参照品,相应的检测抗体的试剂盒应有阴性对照品。以双抗体夹心法测HCG为例,在NC膜中央滴加抗β-HCG抗体,结合物为金标记的抗β-HCG抗体。

 3、操作:
 ① 将反应板平放于实验台,于小孔内滴加标本1-2滴,待完全渗入。此时标本中的HCG与NC膜上的抗β-HCG相结合。
 ② 于小孔内滴加结合物试剂1-2滴,等完全渗入。金标记的抗β-HCG抗体与NC膜上的HCG形成双抗体夹心复合物。因胶体金为红色,在NC膜上出现红色斑点。
 ③ 于小孔内滴加洗涤液2-3滴,待完全渗入。
 ④ 判读结果:在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判阳性反应;反之,则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
三、免疫层析试验(ICA )
 ICA是继IFA之后发起来的另一种膜固相免疫测定。与IFA利用微孔膜的过滤性能不同,ICA中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用向另一端移动,犹如层析一般。移动过程中被分析物与固定于膜上某一区域的受体(抗原或抗体)结合而被固相化,无关物则越过该区域而被分离,然后通过标记物的显色来判定实验结果。以胶体金为标记物的试验称为金免疫层析试验(GICA)。

1、试剂:ICA中所用的试剂全部为干试验,它们被组合在一试纸条上。试剂条的底板为一单面胶塑料片,A、B两端粘贴有吸水材料。加样端A为样品垫,可用的材料有滤纸,多孔聚乙烯和玻璃纤维等,按分析物和试剂的不同选择合适的。B端为吸水垫,材料则以吸水性强的滤纸为佳。G处为结合物垫,胶体金结合物干燥固定在玻璃纤维膜等材料上。G、B之间粘贴有吸附有受体的硝酸纤维素膜,受体(抗原或抗体)以直线形式包被在膜上。

2、操作:
   以双抗体夹心法测HCG为例。试条中G处为金标记的抗β-HCG,NC膜上T处包被抗β-HCG,C处包被抗小鼠IgG抗体。测试时在A端加尿液(或将A端浸入尿液中),通过层析作用,尿液向B端移动,流经G区时将金标记抗α- HCG抗体复溶,若尿液中含HCG,即形成抗α-HCG-HCG复合物;

移动至T区,形成金标抗α-HCG- HCG-抗β-HCG复合物,在T区显示红色线条,为阳性反应,多余的金标记抗α-HCG移动至C区时被抗小鼠IgG抗体捕获,而显示出红色质控线条。如尿液中不含HCG,在T区不出现红色线条,仅在C区出现红色线条,试验结果为阴性,如C区无红色线条出现,表示试验无效。

四、临床应用
1、感染性疾病的抗原、抗体的检测:
     可检测的抗原有HBsAg, HBeAg,疟原虫抗原、大肠埃希杆菌抗原等。可检测的抗体有:抗结核杆菌抗体,抗幽门螺杆菌抗体,抗HBs,抗HIV抗体,抗登革热抗体,梅毒抗体等。

2、各种蛋白质的检测:甲胎蛋白、癌胚抗原、肌红蛋白、肌钙蛋白、尿蛋白、粪便血红蛋白等。
3、激素的检测:HCG、LH、FSH、TSH,其中尿HCG的检测应用最广。
4、药物检测:主要检测毒品类,如吗啡,可卡因,鸦片等。

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无极血康中医医院院长袁六妮

系中国民营医疗机构协会理事、石家庄市政协委员、石家庄市劳动模范,从事医疗工作40余年,继承和发扬中国传统医学文化,以血液病的临床研究为主题,汲取传统医学精华,在攻克治疗血液病方面取得了有效成果,积累了丰富 的经验。

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